Caldo de fermentación wikipedia
Método para la purificación de un oligosacárido, preferentemente un oligosacárido neutro de la leche humana (HMO) o un HMO sialilado, a partir de un caldo de fermentación, comprendiendo el método – proporcionar un caldo de fermentación que contiene el oligosacárido de interés, biomasa, células microbianas y carbohidratos distintos del oligosacárido de interés; – eliminar las células microbianas del caldo de fermentación, proporcionando así una corriente de proceso; – someter la corriente de proceso a una primera etapa de filtración utilizando una membrana de nanofiltración, proporcionando así un filtrado que contiene el oligosacárido de interés; – someter el filtrado a una segunda etapa de filtración utilizando una membrana de nanofiltración, proporcionando así un retentado que contiene el oligosacárido de interés; y – eliminar las sales de la corriente de proceso utilizando electrodiálisis, proporcionando así una preparación purificada del oligosacárido de interés.
La presente invención se refiere a la producción de oligosacáridos por fermentación microbiana a escala industrial. Más específicamente, la presente invención se refiere a la purificación de un oligosacárido de interés a partir de un caldo de fermentación mediante el uso de métodos de filtración.
Ejemplos de caldo de fermentación
Se inocularon 96 muestras de soluciones de fluidos intravenosos (D5/025 NS) con S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, E. aglomerans o C. albicans en concentraciones de .1, 1, 10 o 10(2) organismos/ml. Se cultivaron en tubos que contenían 5 ml de caldo doblemente enriquecido y tras pasarlos por un filtro de membrana de .45 mu de poro. Tras 24 horas de incubación, los cultivos de caldo fueron un 68% más sensibles que los cultivos de filtro (p inferior a 0,001). En la concentración más baja (.1 organismo/ml), los cultivos de caldo sólo eran un 45% más sensibles que la técnica de filtro de membrana tras 24 horas de crecimiento (p inferior a 0,001). Los filtros de membrana proporcionan un método rápido para detectar y cuantificar con precisión la presencia de contaminación microbiana incluso a niveles de concentración muy bajos. La sencillez y precisión del método de filtración ofrece al clínico un valioso complemento en el manejo de casos sospechosos de sepsis relacionada con fluidos intravenosos.
Composición del caldo de fermentación
Por ejemplo, al cocer a fuego lento un lote de caldo de vacuno (3500 kilos de huesos de vacuno como materia prima), el proceso prepara unos 4500 litros de caldo de vacuno cocido y 250-400 litros de grasa animal. La técnica de cocción correcta debe conocerse detenidamente y con detalle para entender cuáles son los factores y cómo afectan al proceso de cocción de acuerdo con que la capa de caldo sobresalga en el fondo de la olla y la capa de grasa separada en la parte superior del caldo.
Una vez finalizado el proceso de cocción en un módulo de cocción, el caldo cocido se escurre a través de una línea de caldo para su filtrado y continúa hacia un tanque de producto crudo. El medidor de grados Brix muestra cuándo la capa de grasa en la parte superior del caldo se ha vuelto tan baja dentro de la olla que la grasa se escurre con el caldo que va a filtrarse. En este caso, se cierra la línea de caldo y se abre la línea de grasa, a lo largo de la cual la grasa escurre hacia el tanque de grasa.
En un proceso de cocción de caldo de hueso, esta unidad filtra el caldo y la grasa animal. Filtra las impurezas de la grasa de hueso a través de un colador y las posibles pequeñas partículas del caldo hervido a través de un filtro de calcetín. Si quedan pequeños fragmentos de hueso en el caldo de carne cocida o pequeñas partículas de cáscaras en el caldo de gambas, se filtran eficazmente en esta fase. Es posible conectar un colador vibratorio al proceso de filtrado del caldo.
Filtración en el proceso de fermentación
Además, el caldo de fermentación se filtró utilizando papel de filtro (Grado 1 11 lm, Whatman, Reino Unido), el filtrado libre de células se mezcló con etanol (filtrado:etanol = 1 1,5) y la mezcla se sometió a centrifugación a 2600×g durante 10 min.
Los cultivos se detuvieron 10 días después de la inoculación en todas las condiciones de inducción, y los caldos de cultivo (secretomas) se filtraron (utilizando una membrana de polietersulfona de 0,2 μm, Vivaspin, Sartorius), se diafiltraron con una solución tampón de acetato 50 mM de pH 5,2, se concentraron (Vivaspin con una membrana de polietersulfona de 10 kDa de corte, Sartorius) y se almacenaron a -20°C hasta su uso.